Mauruuru koe mo te toro ki Nature.com.Ko te putanga pūtirotiro e whakamahia ana e koe he iti te tautoko CSS.Mo te wheako pai rawa atu, e taunaki ana matou me whakamahi koe i tetahi kaitirotiro kua whakahoutia (me monohia ranei te Aratau Hototahi ki Internet Explorer).I tenei wa, hei whakarite i te tautoko tonu, ka tukuna e matou te waahi kaore he momo me te JavaScript.
Ko te Toxoplasma gondii he parapara protozoan intracellular e whakarereke ana i te taiao moroiti o te kaihautu kua pangia, e mohiotia ana e pa ana ki te tupuranga o te mate pukupuku roro.I roto i tenei rangahau, e whakapae ana matou ko te exosomal miRNA-21 mai i te mate Toxoplasma e whakatairanga ana i te tipu o te pukupuku roro.Ko nga Exosome mai i te Toxoplasma-infected BV2 microglia i tohuhia me te whakauru o roto o nga pūtau glioma U87 i whakapumautia.I wetewetehia nga whakaaturanga whakaaturanga microRNA exosomal ma te whakamahi i nga huinga o te microRNA me te microRNA-21A-5p e hono ana ki te Toxoplasma gondii me te tohatoha puku.I tirotirohia ano e matou nga taumata mRNA o nga ira e pa ana ki te puku i roto i nga pūtau glioma U87 ma te whakarereke i nga taumata miR-21 i roto i nga exosome me te paanga o nga exosome ki te tipu o te pūtau glioma U87 tangata.I roto i nga exosomes o te U87 glioma pūtau kua pangia e te Toxoplasma gondii, ka piki ake te whakaaturanga o te microRNA-21 me te whakaheke i te mahi o nga ira antitumor (FoxO1, PTEN, me PDCD4).Ko nga exosome i ahu mai i te BV2 kua pangia e te Toxoplasma ka whakahiato te tipu o nga pūtau glioma U87.Ko nga Exosome e whakaawe ana i te tipu o nga pūtau U87 i roto i te tauira puku kiore.Ko ta matou whakaaro ko te piki ake o te exosomal miR-21 i roto i te Toxoplasma-infected BV2 microglia ka whai waahi nui hei kaiwhakatairanga tipu o nga pūtau i roto i nga pūtau glioma U87 ma te whakaheke i nga ira antitumor.
E kiia ana, neke atu i te 18.1 miriona nga keehi o te mate pukupuku matatau i kitea i te ao katoa i te tau 2018, me te tata ki te 297,000 nga pukupuku o te punaha o te puku o te puku ka kitea ia tau (1.6% o nga pukupuku katoa)1.Ko nga rangahau o mua kua whakaatu ko nga mea morearea mo te whakawhanake i nga pukupuku roro tangata ko nga momo hua matū, te hitori o te whanau, me te iraruke katote mai i nga taputapu rongoa me nga taputapu taatai.Heoi, kaore i te mohiotia te take tika o enei mate kino.Tata ki te 20% o nga mate pukupuku katoa puta noa i te ao ka puta mai i nga apiha hopuhopu, tae atu ki nga wheori, huakita me nga pirinoa3,4.Ko nga tukumate hopuhopu e whakararu ana i nga tikanga ira o te pūtau kaihautu, penei i te whakatikatika i te DNA me te huringa o te pūtau, ka puta te mumura roa me te kino o te punaha mate5.
Ko nga mate hopuhopu e pa ana ki te mate pukupuku o te tangata ko nga tukumate huaketo tino noa, tae atu ki te papillomavirus tangata me te mate hepatitis B me C.Ka taea hoki e nga parapara te whai waahi ki te whanaketanga o te mate pukupuku tangata.He maha nga momo parapara, ara ko Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis me Hymenolepis nana, kua uru ki nga momo mate pukupuku tangata 6,7,8.
Ko te Toxoplasma gondii he protozoan intracellular e whakahaere ana i te microenvironment o nga pūtau ope kua pangia.E kiia ana ka pangia e tenei parapara te tata ki te 30% o te taupori o te ao, ka mate te taupori katoa9,10.Ka pangia e te Toxoplasma gondii nga whekau tino nui, tae atu ki te punaha nerve matua (CNS), ka pa mai nga mate kino penei i te mate meningitis me te encephalitis, ina koa i nga turoro mate mate9.Engari, ka taea hoki e Toxoplasma gondii te whakarereke i te taiao o te kaihautu kua pangia ma te whakarereke i te tipu o te pūtau me nga urupare aukati i roto i nga tangata kore mate, e arai ana ki te pupuri i te mate mate asymptomatic 9,11.He mea whakamiharo, i runga i te hononga i waenga i te T. gondii prevalence me te mate pukupuku o te roro, ko etahi o nga ripoata e kii ana ko nga huringa taiao o te kaihautu i roto i te vivo na te mate T. gondii mau tonu he rite ki te taiao moroiti pukupuku.
Ko nga Exosome e mohiotia ana ko nga kaiwhakawhitiwhiti-a-waea e tuku ihirangi koiora, tae atu ki nga pūmua me nga waikawa nucleic, mai i nga pūtau tata16,17.Ka taea e nga Exosome te awe i nga tukanga koiora e pa ana ki te puku penei i te anti-apoptosis, te angiogenesis, me te metastasis i roto i te taiao moroiti puku.Ina koa, ko nga miRNA (miRNA), ko nga RNA kore-waehere iti e tata ana ki te 22 nucleotides te roa, he mea nui nga kaiwhakahaere ira i muri i te whakawhitinga e whakahaere neke atu i te 30% o te mRNA tangata na roto i te miRNA-induced silencing complex (miRISC).Ka taea e Toxoplasma gondii te whakararu i nga tukanga koiora ma te whakahaere i nga korero miRNA i roto i nga kaihautu pangia.Kei roto i nga miRNA kaihautu nga tohu whakahirahira mo te whakahaere i nga tukanga koiora kaihautu kia tutuki ai te rautaki oranga o te parapara.No reira, ma te ako i nga huringa i roto i te tohu miRNA kaihautu i runga i te mate ki a T. gondii ka taea te maarama ake ki te taunekeneke i waenga i te kaihautu me T. gondii.Ae, ko Thirugnanam et al.15 i whakaaro ko T. gondii te whakatairanga i te mate pukupuku o te roro ma te whakarereke i tana whakahuatanga ki runga i nga miRNA kaihautu motuhake e pa ana ki te tipu o te pukupuku me te kitea ka taea e T. gondii te hanga gliomas i roto i nga kararehe whakamatautau.
Ko tenei rangahau e arotahi ana ki te whakarereketanga o te exosomal miR-21 i roto i te microglia ope kua pangia e te Toxoplasma BV2.I kitea e matou he waahi ka taea te whakarereke i te exosomal miR-21 i roto i te tipu o nga pūtau glioma U87 na te pupuri i roto i te karihi o FoxO1 / p27, koinei te whaainga o te miR-21 kua tino whakahuahia.
Ko nga Exosome i ahu mai i te BV2 i whiwhi ma te whakamahi i te centrifugation rerekee ka whakamanahia e nga momo tikanga hei aukati i te poke ki nga waahanga pūkoro me etahi atu vesicles ranei.Ko te SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) i whakaatu i nga tauira motuhake i waenga i nga pūmua i tangohia mai i nga pūtau BV2 me nga exosomes (Whakaahua 1A), a i aromatawaihia nga tauira mo te aroaro o Alix, i tātarihia e te Western blotting o nga tohu pūmua exosomal i roto i.I kitea te tapanga Alix i roto i nga pūmua exosome engari kaore i roto i nga pūmua lysate pūtau BV2 (Fig. 1B).I tua atu, ko te RNA kua purea mai i nga exosome i ahu mai i te BV2 i tātarihia ma te whakamahi i te bioanalyzer.18S me te 28S ribosomal subunits he varavara kitea i roto i te tauira hekenga RNA exosomal, e tohu ana i te purea pono (Whakaahua 1C).Ka mutu, ka whakaatu te karu hiko tuku irahiko he tata ki te 60-150 nm te rahi o nga exosome i kitea, he ahua kapu ano te ahua o te ahua o waho (Fig. 1D).
Te tohu o nga exosome i ahu mai i nga pūtau BV2.(A) Wharangi pepa raraunga haumaru.I wehea nga pūmua mai i nga pūtau BV2, i nga exosome ranei i ahu mai i te BV2.He rereke nga tauira pūmua i waenga i nga pūtau me nga exosome.(B) Te wetewete i te paraka o te hauauru o te tohu o waho (Alix).(C) Aromātai o te RNA kua purea mai i nga pūtau BV2 me te BV2 i ahu mai i nga exosome ma te whakamahi i te bioanalyzer.No reira, ko te 18S me te 28S ribosomal subunits i roto i nga pūtau BV2 he uaua i kitea i roto i te RNA exosomal.(D) Ko te karu hiko whakawhiti i whakaatu ko nga exosome kua wehea mai i nga pūtau BV2 i poke kino ki te 2% uranyl acetate.He tata ki te 60-150 nm te rahi me te ahua kapu (Waiata me Jung, nga raraunga kaore i panuitia).
Ko te whakaurunga o roto o te pukoro o nga exosome i ahu mai i te BV2 ki roto i nga pūtau glioma tangata U87 i kitea ma te whakamahi i te microscopy confocal.Ko nga exosome kua tapaina ki te PKH26 kei roto i te cytoplasm o nga pūtau U87.I pania te nuclei ki te DAPI (Fig. 2A), e tohu ana ka taea te whakauru i nga exosome i puta mai i te BV2 e nga pūtau manaaki me te awe i te taiao o nga pūtau kaiwhiwhi.
Ko te whakaurunga o nga exosome i ahu mai i te BV2 ki roto i nga pūtau glioma U87 me nga exosome i ahu mai i te BV2 kua pangia e te Toxoplasma RH na te tipu o nga pūtau glioma U87.(A) Ko nga Exosome i kohia e nga ruma U87 i inehia e te miihini whakaata.Ko nga pūtau glioma U87 i whakakororiahia me nga exosome kua tapaina ki te PKH26 (whero) me te kore mana mo te 24 haora.I pania nga karihi ki te DAPI (puru) katahi ka tirohia i raro i te karuiti confocal (pae tauine: 10 μm, x 3000).(B) U87 glioma cell proliferation was determined by cell proliferation assay.Ko nga pūtau glioma U87 i tukuna ki nga exosome mo te wa kua tohua. *P <0.05 i whiwhihia e te tauira t whakamātautau. *P <0.05 i whiwhihia e te tauira t whakamātautau. *P <0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *P <0.05 mā te whakamātautau-t a te Ākonga. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 i whiwhi ma te whakamahi i te whakamatautau-t a te tauira.
Whai muri i te whakapumautanga o te whakaurunga o nga exosome i ahu mai i te BV2 ki roto i nga pūtau glioma U87, i mahia e matou nga whakamatautau whakahiatotanga o nga pūtau ki te tirotiro i te mahi a te BV2 i ahu mai i te Toxoplasma i ahu mai i nga exosome i roto i te whanaketanga o nga pūtau glioma tangata.Ko te maimoatanga o nga pūtau U87 me nga exosomes mai i te T. gondii-infected BV2 cells i whakaatu ko T. gondii-infected BV2-derived exosomes i tino nui ake te tipu o nga pūtau U87 ki te whakahaere (Fig. 2B).
I tua atu, ko te tipu o nga pūtau U118 he rite nga hua ki a U87, i te mea ko te Toxoplasma stimulated exosomes i puta ai nga taumata teitei o te tipu (kaore nga raraunga i whakaatuhia).I runga i enei raraunga, ka taea e matou te tohu ko te BV2-i ahu mai i te Toxoplasma-infected exosomes he mahi nui ki te tipu o te pūtau glioma.
Hei whakatewhatewha i te paanga o nga exosomes BV2 i pangia e Toxoplasma i runga i te whanaketanga puku, i werohia e matou nga pūtau glioma U87 ki nga kiore tahanga mo te tauira xenograft me te werohia nga exosome i ahu mai i te BV2, i te RH ranei i pangia e te BV2.Whai muri i te kitea o nga pukupuku i muri i te wiki 1, ka wehewehea ia roopu whakamatautau o te 5 kiore i runga i te rahi o te puku kia rite ai te timatanga, ka inehia te rahi o te puku mo te 22 ra.
I roto i nga kiore me te tauira xenograft U87, he nui ake te rahi o te pukupuku me te taumaha i kitea i roto i te roopu exosome RH i puta mai i te BV2 i te ra 22 (Fig. 3A,B).I tetahi atu taha, kaore he rereketanga nui o te rahi o te pukupuku i waenga i te roopu exosome i puta mai i te BV2 me te roopu whakahaere i muri i te maimoatanga exosome.I tua atu, ko nga kiore i werohia ki nga pūtau glioma me nga exosome i whakaatu kanohi i te rahinga o te puku nui i roto i te roopu o nga exosome BV2 i pangia e te RH (Fig. 3C).Ko enei hua e whakaatu ana ko te BV2-i ahu mai i te Toxoplasma-infected exosomes ka whakaawe i te tipu glioma i roto i te tauira puku kiore.
Oncogenesis (AC) o BV2-ahua exosomes i roto i te U87 xenograft tauira kiore.Ko te rahi o te tumo (A) me te taumaha (B) i tino piki ake i roto i nga kiore tahanga BALB/c i tukinotia ki nga exosomes pangia RH i ahu mai i te BV2.BALB/c kiore tahanga (C) i werohia i raro i te kiri ki te 1 x 107 U87 pūtau i whakatarewahia ki te ranunga Matrigel.E ono nga ra i muri i te werohanga, 100 μg o BV2-ahua exosomes i tukinotia ki nga kiore.Ko te rahi o te tumo me te taumaha i inehia i nga ra kua tohua me muri i te patunga tapu. *P <0.05. *P <0.05. *Р < 0,05. *P <0.05. *P <0.05. *P <0.05. *Р < 0,05. *P <0.05.
Ko nga raraunga i whakaatu ko 37 miRNAs (16 overexpressed me 21 downexpressed) e pa ana ki te mate pukupuku, ki te whakawhanaketanga pukupuku ranei i tino whakarereketia i roto i te microglia i muri i te mate o te Toxoplasma RH riaka (Fig. 4A).Ko nga taumata whakahuatanga o te miR-21 i waenga i nga miRNA kua whakarereketia i whakapumauhia e te RT-PCR i roto i nga exosome i ahu mai i te BV2, nga exosome i rongoa ki nga pūtau BV2 me U87.Ko te whakaaturanga o te miR-21 i whakaatu i te pikinga nui o nga exosomes mai i nga pūtau BV2 i pangia e te Toxoplasma gondii (RH riaka) (Fig. 4B).Ka piki ake nga taumata whakahuatanga o te miR-21 i roto i nga ruma BV2 me U87 i muri i te tangohanga o nga exosome kua whakarereketia (Fig. 4B).Ko nga taumata whanaungatanga o te korero miR-21 i roto i nga pukupuku roro o nga turoro pukupuku me nga kiore i pangia e te Toxoplasma gondii (ME49 strain) he nui ake i nga mana whakahaere, ia (Fig. 4C).Ko enei hua e hono ana ki nga rereketanga i waenga i nga taumata korero o nga microRNA matapae me te whakapumau i roto i te vitro me te in vivo.
Nga huringa i roto i te korero o te exosomal miP-21a-5p i roto i te microglia kua pangia e te Toxoplasma gondii (RH).(A) Ka whakaatu i nga huringa nui o te siRNA e pa ana ki te mate mate, ki te whanaketanga puku ranei i muri i te mate T. gondii RH.(B) I kitea nga taumata korero miR-21 e pa ana ki te RT-PCR i roto i nga exosomes i ahu mai i te BV2, i te BV2-treated exosome, me nga pūtau U87.(C) I kitea nga taumata korero miR-21 i roto i nga kopa roro o nga turoro puku (N=3) me nga kiore kua pangia e te Toxoplasma gondii (ME49 riaka) (N=3). *P <0.05 i whiwhihia e te tauira t whakamātautau. *P <0.05 i whiwhihia e te tauira t whakamātautau. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 i whiwhi ma te whakamahi i te whakamatautau-t a te Tauira. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 i whiwhi ma te whakamahi i te whakamatautau-t a te tauira.
Ko nga putanga mai i nga pūtau BV2 kua pangia e te RH i arahina ki te tipu o nga gliomas i roto i te vivo me te in vitro (Fig. 2, 3).Hei kite i nga mRNA e tika ana, i tirotirohia e matou nga taumata mRNA o nga ira ira antitumor, pouaka marau O1 (FoxO1), PTEN, me te mate pūtau 4 (PDCD4) kua whakamaheretia i roto i nga pūtau U87 kua pangia e te exosome i ahu mai i te BV2, i te RH BV2 ranei.Kua whakaatuhia e te rangahau bioinformatics he maha nga ira e pa ana ki te pukupuku, tae atu ki nga ira FoxO1, PTEN, me te PDCD4, he waahi hono miR-2121,22.I whakaitihia nga taumata mRNA o nga ira whaainga antitumor i roto i te RH-infected BV2-derived exosomes whakaritea ki te BV2-derived exosomes (Fig. 5A).I whakaatu a FoxO1 i te whakahekenga o nga taumata pūmua i roto i te RH-pangia BV2-ahua exosomes whakaritea ki te BV2-ahua exosomes (Whakaahua 5B).I runga i enei hua, ka taea e maatau te whakapumau ko nga exosome i ahu mai i te BV2 kua pangia e te RH ka whakaheke i nga ira anti-oncogenic, ka mau tonu to raatau mahi ki te tipu puku.
Toxoplasma RH-huatia BV2 exosome i ahu mai i te peehi i nga ira antitumor i roto i nga pūtau glioma U87 e te Toxoplasma RH-whare BV2-ahua exosomes.(A) PCR wa-tūturu o FoxO1, PTEN me PDCD4 whakaaturanga i roto i te exosomes i ahu mai i te T. gondii RH-infected BV2 whakaritea ki PBS exosomes.I whakamahia te mRNA β-actin hei mana whakahaere.(B) Ko te korero a FoxO1 i whakatauhia e te uru o te Hauauru me nga raraunga densitometry i arotakea tauanga ma te whakamahi i te kaupapa ImageJ. *P <0.05 i whiwhihia e te tauira t whakamātautau. *P <0.05 i whiwhihia e te tauira t whakamātautau. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 i whiwhi ma te whakamahi i te whakamatautau-t a te Tauira. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 i whiwhi ma te whakamahi i te whakamatautau-t a te tauira.
Kia mohio ai koe ki te paanga o te miP-21 i roto i nga exosomes i runga i te ture ira e pa ana ki te puku, i whakawhitia nga pūtau U87 me te aukati o te miP-21 ma te whakamahi i te Lipofectamine 2000 ka hauhake nga pūtau 24 haora i muri i te whakawhitinga.Ko nga taumata whakapuaki FoxO1 me te p27 i roto i nga pūtau kua whakawhitia me nga aukati miR-21 i whakatauritehia ki nga pūtau i tukinotia ki te BV2-ahua exosomes ma te whakamahi i te qRT-PCR (Fig. 6A,B).Ko te whakawhitinga o te aukati miR-21 ki roto i nga ruma U87 i tino whakahekehia te FoxO1 me te p27 whakaaturanga (FIG. 6).
RH-pangia exosomal BV2-i ahu mai i te miP-21 i whakarereke i te whakaaturanga FoxO1/p27 i roto i nga pūtau glioma U87.I whakawhitihia nga pūtau U87 me te aukati miP-21 ma te whakamahi i te Lipofectamine 2000 ka hauhake nga pūtau 24 haora i muri i te whakawhitinga.Ko nga taumata whakapuaki FoxO1 me te p27 i roto i nga pūtau kua whakawhitia me nga aukati miR-21 i whakatauritehia ki nga taumata i roto i nga pūtau i tukinotia ki te BV2-ahua exosomes ma te whakamahi i te qRT-PCR (A, B).
Ki te mawhiti i te urupare aukati a te kaihautu, ka huri te parapara Toxoplasma ki te kookiri kiko.Ka werohia e ratou nga momo kopa, tae atu ki te roro, te ngakau, me te uaua koiwi, puta noa i te oranga o te kaihautu me te whakarereke i te urupare mate a te kaihautu.I tua atu, ka taea e ratou te whakahaere i te huringa pūtau me te apoptosis o nga pūtau kaihautū, te whakatairanga i to raatau tipu14,24.Ko te Toxoplasma gondii te nuinga ka pangia e nga pūtau dendritic ope, neutrophils, me te whakapapa monocyte/macrophage, tae atu ki te microglia roro.Ko te Toxoplasma gondii e whakaohooho ana i te rereketanga o nga macrophages o te M2 phenotype, ka pa ki te whakaora i te patunga i muri i te mate pathogen, me te hono ano ki te hypervascularization me te granulomatous fibrosis.Ko tenei pathogenesis whanonga o te mate Toxoplasma pea e pa ana ki nga tohu e pa ana ki te whanaketanga puku.Ko te taiao kino e whakahaerehia ana e Toxoplasma ka rite pea ki te mate pukupuku o mua.Na reira, ka taea te whakaaro me uru te mate Toxoplasma ki te whanaketanga o nga pukupuku roro.Ko te tikanga, he nui nga reiti o te mate Toxoplasma kua korerohia i roto i te serum o nga turoro he momo pukupuku roro.I tua atu, ko Toxoplasma gondii pea tetahi atu kaikawe mate pukupuku me te mahi tahi ki te awhina i etahi atu mate pukupuku hopuhopu ki te whakawhanake i nga pukupuku roro.I roto i tenei whakaaro, he mea tika kia mohio ko te P. falciparum me te Epstein-Barr huaketo e uru tahi ana ki te hanganga o te lymphoma o Burkitt.
Ko te mahi a nga exosome hei kaiwhakahaere i roto i te rangahau mate pukupuku kua tino tirotirohia.Heoi ano, ko te mahi a te exosome i waenga i nga pirinoa me nga kaihautu kua pangia e kore e tino marama.I tenei wa, he maha nga kaiwhakahaere, tae atu ki nga pūmua huna, kua whakamaramatia nga tikanga koiora e aukati ai nga pirinoa protozoan ki te whakaeke a te kaihautu me te mau tonu i te mate.Ina tata nei, kua tipu ake te ariā ko nga microvesicles hono-protozoan me o ratou microRNAs e taunekeneke ana ki nga pūtau kaihautu ki te hanga i tetahi taiao pai mo to ratau oranga.Na reira, me rangahau ano kia kitea te hononga i waenga i nga miRNA exosomal kua whakarereke me te tipu o te pūtau glioma.Ko te whakarereketanga o te MicroRNA (nga ira kaapu miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 me miR-17-92) ka herea ki te kaiwhakatairanga STAT3 i roto i nga macrophage tangata kua pangia e te toxoplasma, kua whakatauhia me te whakaawe anti -apoptosis hei whakautu ki te mate Toxoplasma gondii 29 .Ko te mate Toxoplasma te whakanui ake i te whakapuakitanga o te miR-17-5p me te miR-106b-5p, e pa ana ki te maha o nga mate hyperproliferative 30.Ko enei raraunga e kii ana ko nga miRNA kaihautu e whakahaeretia ana e te mate Toxoplasma he ngota ngota nui mo te oranga pirinoa me te pathogenesis i roto i te whanonga koiora kaihautu.
Ka taea e nga miRNA whakarereke te awe i nga momo whanonga i te wa o te tiimatanga me te haere whakamua o nga pūtau kino, tae atu ki nga gliomas: te whakaraerae i a ia ano o nga tohu tipu, te koretake ki nga tohu aukati-tupu, te apoptosis, te kore mutunga o te kaha whakahoki, te angiogenesis, te whakaekenga me te metastasis, me te mumura.I roto i te glioma, kua kitea nga miRNA kua whakarereketia i roto i te maha o nga rangahau tohu korero.
I roto i te rangahau o tenei wa, i whakapumautia e matou nga taumata teitei o te korero miRNA-21 i roto i nga pūtau ope kua pangia e te toxoplasma.Ko te miR-21 kua tohua ko tetahi o nga microRNA e tino kaha ana te korero i roto i nga pukupuku totoka, tae atu ki nga gliomas, 33 me ona korero e hono ana ki te tohu o te glioma.Ko te whakaemi i nga taunakitanga e kii ana ko te miR-21 he oncogene hou e mahi ana hei take anti-apoptotic i roto i te tipu o te glioma me te tino kaha ki roto i nga kopa me te plasma o nga mate kino o te roro tangata.Ko te mea whakamiharo, ko te korenga o te miR-21 i roto i nga pūtau glioma me nga kopa ka pa ki te aukati i te tipu o te pūtau na te apoptosis e whakawhirinaki ana ki te caspase.Ko te tātari bioinformatic o nga whaainga matapae miR-21 i kitea he maha nga ira aukati puku e pa ana ki nga ara apoptosis, tae atu ki te mate o te pūtau 4 (PDCD4), te tropomyosin (TPM1), PTEN, me te pouaka marau O1 (FoxO1), me te pae here miR-2121..22.38.
Ko te FoxO1, ko tetahi o nga take tuhi (FoxO), ka uru ki te whakawhanaketanga o nga momo mate pukupuku o te tangata, ka taea hoki te whakahaere i te whakapuakitanga o nga ira aukati pukupuku penei i te p21, p27, Bim, me FasL40.Ka taea e FoxO1 te here me te whakahohe i nga aukati huringa pūtau penei i te p27 hei pehi i te tipu o te pūtau.I tua atu, ko te FoxO1 te kaikorero matua mo te tohu tohu PI3K/Akt me te whakahaere i nga tikanga koiora maha penei i te haere whakamua o te huringa pūtau me te rereketanga o te pūtau ma te whakahohe i te tuhinga p2742.
Hei whakamutunga, e whakapono ana matou ko te exosomal miR-21 i ahu mai i te microglia kua pangia e Toxoplasma ka whai waahi nui hei kaiwhakahaere tipu o nga pūtau glioma (Fig. 7).Engari, me rangahau ano kia kitea he hononga tika i waenga i te exosomal miR-21, te mate Toxoplasma rereke, me te tipu o te glioma.Ko enei hua ka puta he timatanga mo te ako i te hononga i waenga i te mate Toxoplasma me te pa o te glioma.
Kei roto i tenei rangahau he hoahoa hoahoa mo te tikanga o te glioma (roro) carcinogenesis.Ka tuhi te kaituhi ki te PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA).
Ko nga kawa whakamatautau katoa i roto i tenei rangahau, tae atu ki te whakamahinga o nga kararehe, i rite ki te Seoul National University Animal Care and User Committee Standard Ethical Guidelines a i whakaaetia e te Poari Arotake Whakahaere o te Seoul National University School of Medicine (IRB number SNU- 150715).-2).I mahia nga tikanga whakamatautau katoa i runga i nga taunakitanga ARRIVE.
BV2 kiore microglia me te U87 pūtau glioma tangata i whakatipuria i roto i te Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) me te Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene), ia, kei roto ia ia 10% serum bovine fetal, 4 mM l- glutamine, 0.2 mM penicillin me te 0.05 mM streptomycin.I whakatipuhia nga pūtau i roto i te incubator me te 5% CO2 i te 37°C.Ko tetahi atu raina pūtau glioma, U118, i whakamahia hei whakataurite ki nga pūtau U87.
Hei wehe i nga exosomes mai i nga riipene RH me te ME49 kua pangia e te T. gondii, T. gondii tachyzoites (RH strain) i kohia mai i te kohanga puku o nga kiore BALB/c 6-wiki i werohia 3-4 ra i mua.I horoia nga tachyzoites e toru nga wa ki te PBS ka purea e te centrifugation i 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43.Ki te whiwhi tachyzoites o te riaka ME49, ka werohia nga kiore BALB / c intraperitoneally ki nga pukupuku kiko 20 me te huringa tachyzoite i roto i nga kiriu i kohia ma te horoi i te kohanga puku i te ra 6-8 i muri i te mate (PI).Ko nga kiore kua pangia e te PBS.I tipuhia nga tachyzoites ME49 i roto i nga ruma kua taapirihia ki te 100 μg / ml penicillin (Gibco / BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg / ml streptomycin (Gibco / BRL), me te 5% fetal bovine serum (Lonza, Walkersville, MD) .., USA) i te 37 °C me te 5% hauhā.Whai muri i te maara i roto i nga pūtau Vero, ka tukuna nga tachyzoites ME49 e rua nga wa ma te ngira 25 mehua, katahi ka ma roto i te tātari 5 µm hei tango i nga otaota me nga pūtau.I muri i te horoinga, ka tukuna ano nga tachyzoites ki te PBS44.Ko nga kiri o te Toxoplasma gondii riaka ME49 i mau tonu na roto i te werohanga intraperitoneal o nga kiore i wehea mai i te roro o nga kiore C57BL/6 kua pangia (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea).Ko nga roro o nga kiore kua pangia e te ME49 i hauhake i muri i nga marama 3 o te PI me te morohia i raro i te karu karu hei wehe i nga kirikiri.Ko nga kiore kua pangia i pupurihia i raro i nga tikanga kore-mate motuhake (SPF) i te Whare Wananga o Seoul National University School of Medicine.
Ko te RNA katoa i tangohia mai i nga exosomes i ahu mai i te BV2, nga pūtau BV2 me nga kopa ma te whakamahi i te MiRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) e ai ki nga tohutohu a te kaihanga, tae atu ki te wa incubation mo te hikoi elution.I whakatauhia te kukū RNA i runga i te NanoDrop 2000 spectrophotometer.I aromatawaihia te kounga o nga microarrays RNA ma te whakamahi i te Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, Netherlands).
Ko te DMEM me te 10% exosome-poor FBS i whakaritea e te ultracentrifugation i te 100,000g mo te 16 haora i te 4°C me te tātari ma te tātari 0.22 µm (Nalgene, Rochester, NY, USA).Ko nga pūtau BV2, 5 × 105, i whakatipuhia i roto i te DMEM kei roto te 10% FBS exosome-depleted me te 1% antibiotic i te 37 ° C me te 5% CO2.I muri i nga haora 24 o te incubation, ka whakauruhia nga tachyzoites o te riaka RH, ME49 ranei (MOI = 10) ki nga ruma, ka tangohia nga pirinoa kore-whakaeke i roto i te haora, ka whakakiia ki te DMEM.Ko nga Exosome mai i nga pūtau BV2 i wehea e te centrifugation rereke rereke, te tikanga tino whakamahia.Whakaorangia ano te pellet exosome ki te 300 µl PBS mo te RNA, te tātari pūmua ranei.I whakatauhia te kukū o nga exosome taratahi ma te whakamahi i te kete BCA protein assay kit (Pierce, Rockford, IL, USA) me te NanoDrop 2000 spectrophotometer.
Ko nga rerenga mai i nga pūtau BV2 me nga exosome ranei i ahu mai i te BV2 i lysed i roto i te otinga tangohanga pūmua PRO-PREP™ (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Korea) ka utaina nga pūmua ki runga Coomassie kanapa kikorangi puru 10% SDS polyacrylamide gels.I tua atu, ka whakawhitia nga pūmua ki nga kiriuhi PVDF mo te 2 haora.I whakamanahia nga pupuhi o te Hauauru ma te whakamahi i te antibody Alix (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA) hei tohu exosomal.HRP-conjugated koati anti-kiore IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) me te LAS-1000 me te kaitirotiro ahua whakamarama (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) i whakamahia hei antibody tuarua..I mahia te moroiti irahiko tuku ki te ako i te rahi me te ahua o nga exosomes.Ko nga exosome kua wehea mai i nga pūtau BV2 (6.40 µg/µl) i whakaritea i runga i nga mata kua pania te waro me te paru kino ki te 2% uranyl acetate mo te 1 meneti.Ko nga tauira kua whakaritea i kitea i te ngaohiko tere o te 80 kV ma te whakamahi i te JEOL 1200-EX II (Tokyo, Japan) kua whakauruhia ki te kamera ES1000W Erlangshen CCD (Gatan, Pleasanton, CA, USA).
Ko nga exosome i puta mai i te BV2 i whakapokehia ma te whakamahi i te PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) mo nga meneti 15 i te pāmahana rūma.Ko nga pūtau U87, 2 × 105, me te PKH26-tapanga exosomes (whero) ranei kahore exosomes rite te mana kino, i incubated i 37 ° C mo 24 haora i roto i te 5% CO2 incubator.I pania nga karihi pūtau U87 ki te DAPI (puru), ka mau nga pūtau U87 ki te 4% paraformaldehyde mo te 15 min i te 4°C ka tātarihia i roto i te Leica TCS SP8 STED CW confocal microscope system (Leica Microsystems, Mannheim, Germany).kitea.
I whakahiatotia te cDNA mai i te siRNA ma te whakamahi i te Mir-X siRNA te whakahiato whenu tuatahi me te kete SYBR qRT-PCR (Takara Bio Inc., Shiga, Japan).I mahia te PCR ine ine i te wa tuturu ma te whakamahi i te punaha kitenga PCR iQ5 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ma te whakamahi i nga tauira tuatahi me nga tauira i konatunatua ki te SYBR Premix.I whakanuia te DNA mo nga huringa 40 o te denaturation i te 95°C mo te 15 s me te annealing i te 60°C mo te 60 s.I wetewetehia nga raraunga mai ia tauhohenga PCR ma te whakamahi i te waahanga tātari raraunga o te iQ™5 rorohiko rorohiko (Bio-Rad).Ko nga huringa patata o te whakaaturanga ira i waenga i nga ira kua tohua me te β-actin/siRNA (me te U6) i tatauhia ma te whakamahi i te tikanga pihi paerewa.Ko nga raupapa tuatahi e whakamahia ana e whakaatuhia ana i te Ripanga 1.
3 x 104 U87 pūtau glioma i ruia ki roto i nga pereti 96-puna me te konatunatua ki te Toxoplasma-infected exosomes i ahu mai i te BV2 (50 μg/mL) me te nonpulse exosomes i ahu mai i te BV2 (50 μg/mL) hei whakahaere i te 12, 18 me te 36 haora. .I whakatauhia te tere o te pikinga o te pūtau ma te whakamahi i te Kete Tatau Pūtau-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan) (Whakaahua Tāpiri S1-S3) 46.
5-wiki-pakeke wahine BALB/c kiore tahanga i hokona i Orient Bio (Seongnam-si, South Korea) ka pupuri takitahi i roto i te whare herehere horomata i te pāmahana rūma (22±2°C) me te haumākū (45±15°C).%) i te pāmahana rūma (22±2°C) me te haumākū (45±15%).Ko te huringa marama 12-haora me te huringa pouri 12-haora i mahia i raro i te SPF (Seoul National University School of Medicine Animal Center).I wehea matapōkeretia nga kiore kia toru nga roopu o te 5 kiore ia me nga roopu katoa i werohia i raro i te kiri me te 400 ml o te PBS kei roto 1 x 107 U87 nga pūtau glioma me te take tipu i whakaitihia te BD Matrigel ™ (BD Science, Miami, FL, USA).E ono nga ra i muri i te werohanga puku, ka werohia te 200 mg o nga exosome i ahu mai i nga pūtau BV2 (kaore he mate Toxoplasma) ki te waahi pukupuku.E rua tekau ma rua nga ra i muri i te mate pukupuku, ka inehia te rahi o te pukupuku o nga kiore i ia roopu ki te caliper e toru nga wa i te wiki, a ka tatauhia te rahinga pukupuku e te tauira: 0.5×(whanui)×2×roa.
Te tātari korero MicroRNA ma te whakamahi i te miRCURYTM LNA miRNA raupapa, 7th whakatupuranga he, mmu me rno arrays (EXIQON, Vedbaek, Denmark) hipoki 1119 kiore pai-tohu i roto i 3100 tangata, kiore me te kiore miRNA hopu probes.I roto i tenei tukanga, 250 ki te 1000 ng o te tapeke RNA i tangohia mai i te 5′-phosphate ma te maimoatanga ki te phosphatase alkaline intestinal kuao kau ka whai i te tapanga ki te tae kowhaiwhai matomato Hy3.Ko nga tauira kua tapaina ka ranuhia ma te uta i nga kiriata microarray ma te whakamahi i te kete rūma whakakotahi (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) me te kete kiriata ranu (Agilent Technologies).I whakahaerehia te whakakotahitanga mo nga haora 16 i te 56 ° C, katahi ka horoia nga microarrays i runga i nga tohutohu a te kaihanga.I karapahia nga kiriata microarray kua tukatukahia ma te whakamahi i te punaha matawai moroiti Agilent G2565CA (Agilent Technologies).I kawemai nga whakaahua karapahia ma te whakamahi i te rorohiko Agilent Feature Extraction putanga 10.7.3.1 (Agilent Technologies) me te kaha o te rere o ia ahua i tohua ma te whakamahi i te konae GAL o te kawa Exiqon kua whakarereketia.Ko nga raraunga Microarray mo te rangahau o naianei ka tukuna ki roto i te paataka raraunga GEO i raro i te nama whakauru GPL32397.
Ko nga whakaaturanga korero o nga miRNA exosomal pakeke i roto i te microglia o nga riaka RH, ME49 ranei kua pangia e te Toxoplasma i tātarihia ma te whakamahi i nga momo taputapu whatunga.Ko nga miRNA e pa ana ki te whakawhanaketanga puku i tautuhia ma te whakamahi i te miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ka tātarihia me te kaha tohu tohu (log2) nui ake i te 8.0.I roto i nga miRNA, i kitea nga miRNA rereke rereke i kitea he nui ake i te 1.5-fold i whakarerekehia e te tātari tātari o nga miRNA i whakarerekehia e nga riaka RH, ME49 ranei kua pangia e te T. gondii.
I ruia nga pūtau i roto i nga pereti ono-puna (3 x 105 pūtau / puna) i roto i te opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) ma te whakamahi i te Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).Ka whakatipuhia nga ruma kua whakawhiti mo te 6 haora, katahi ka hurihia te reo ki te reo hou.I hauhakehia nga pūtau 24 haora i muri i te whakawhitinga.
Ko te tātari tatauranga te nuinga i mahia ma te whakamahi i te whakamatautau-t a nga akonga me te rorohiko Excel (Microsoft, Washington, DC, USA).Mo te tātari kararehe whakamatautau, i mahia he ANOVA e rua-ara ma te whakamahi i te rorohiko Prism 3.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). Ko nga uara-P <0.05 i kiia he mea tino nui. Ko nga uara-P <0.05 i kiia he mea tino hirahira. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Ko nga uara P <0.05 i whakaarohia he tino nui. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 P ‼< 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Ko nga uara P <0.05 i whakaarohia he tino nui.
Ko nga tikanga whakamatautau katoa i whakamahia i roto i tenei rangahau i whakaaetia e te Poari Arotake Whakaakoranga o te Seoul National University School of Medicine (IRB number SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.I whakatauhia te mate pukupuku o te ao me te mate i te 2018: nga puna me nga tikanga a GLOBOCAN.Whakamaori.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS He tirohanga ki nga ahuatanga morearea o nga pukupuku roro me o raatau mahi whakaora. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS He tirohanga ki nga ahuatanga morearea o nga pukupuku roro me o raatau mahi whakaora.Rashid, S., Rehman, K. me Akash, MS He arotake o nga mea morearea mo nga pukupuku roro me nga mahi whakaora nui. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Te mohio hohonu ki nga ahuatanga morearea o te mate pukupuku roro me nga mahi rongoa.Rashid, S., Rehman, K. me Akash, MS He arotake o nga mea morearea mo nga pukupuku roro me nga mahi whakaora nui.Pūtaiao hauora koiora.Kai rongoā.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Ko nga taunekeneke-huakita-viral i roto i nga mate pukupuku o te tangata me nga mate pukupuku o te wahine: He whakarāpopototanga o nga taunakitanga epidemiologic me te taiwhanga. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Ko nga taunekeneke-huakita-viral i roto i nga mate pukupuku o te tangata me nga mate pukupuku o te wahine: He whakarāpopototanga o nga taunakitanga epidemiologic me te taiwhanga.Kato I., Zhang J. me Sun J. Ko nga taunekeneke-huakita-viral i roto i te mate pukupuku o te mate pukupuku o te tangata me te waahi o te wahine: he whakarāpopototanga o nga raraunga mate pukupuku me te taiwhanga. Kato, I, Zhang, J. & Sun, J. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Te taunekeneke Bacterio-viral i roto i te nakunakutanga o te waha o te tangata me te waahanga uri wahine: te whakarāpopototanga o te pūtaiao mate rongonui me nga taunakitanga taiwhanga.Kato I., Zhang J. me Sun J. Te taunekeneke-huakita-viral i roto i te mate pukupuku o te tangata me te mate pukupuku wahine: he whakarāpopototanga o nga raraunga mate urutomo me te taiwhanga.Te mate pukupuku 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL Mai i te mate ki te mate pukupuku: Me pehea te whakarereketanga o nga wheori puku DNA i te waro o te puku o te kaihautu me te paopaohanga lipid. Magon, KL & Parish, JL Mai i te mate ki te mate pukupuku: Me pehea te whakarereketanga o nga wheori puku DNA i te waro o te puku o te kaihautu me te paopaohanga lipid.Mahon, KL me Pariha, JL Te mate ahi ki te mate pukupuku: me pehea te whakarereketanga o nga wheori puku-a-DNA ki te huri i te waro-a-roto o te waro me te lipid metabolism. Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢。 Magon, KL & Parish, JL Mai i te mate ki te mate pukupuku: me pehea te whakarereketanga o nga wheori puku DNA i te waro o te pokapū o te kaihautu me te whakawhitinga lipid.Mahon, KL me Pariha, JL Te ahi i te mate ki te mate pukupuku: me pehea te whakarereketanga o nga wheori puku DNA i te waro me te lipid metabolism i roto i nga pūtau manaaki.Koiora Tuwhera.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.Catechol estrogens o schistosomes me rewharewha ate me helminth-pānga mate pukupuku.mua.wera o roto.5, 444 (2014).